1 范圍

本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中甲氧芐啶殘留量的制樣和高效液相色譜測定方法。

本標準適用于魚(包括鰻鱺)、蝦、蟹和龜鱉可食組織中甲氧芐啶殘留量的檢測。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的（興）版本。凡是不注日期的引用文件，其（興）版本適用于本標準。

GB/T 1.1-2000標準化工作導則第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則

GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

SC/T 3016水產(chǎn)品抽樣方法

3 原理

試料中殘留的甲氧芐啶，用三氯甲烷和酸性甲醇溶液提取，二氯甲烷反萃取，MCX固相萃取柱凈化，高效液相色譜-紫外測定，外標法定量。

4 試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。

4.1 甲氧芐啶標準品：含量≥98%。

4.2 三氯甲烷：色譜純。

4.3 甲醇：色譜純。

4.4 高氯酸：優(yōu)級純。

4.5 硫酸：優(yōu)級純。

4.6 二氯甲烷：色譜純。

4.7 氫氧化鈉：優(yōu)級純。

4.8 乙酸：優(yōu)級純。

4.9 氨水

4.10 MCX陽離子固相萃取柱：60mg/3mL,或相當者。

4.11 0.5%高氯酸溶液：取高氯酸5mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.12 0.1moL/L硫酸溶液：取硫酸5.4mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.13 2moI/L氫氧化鉀：取氫氧化鉀112.2g,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.14 5%乙酸溶液：取乙酸50mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.15 5%氨水甲醇溶液：取氨水5ml,用甲醇溶解并稀釋100mL。

4.16 100ug/mL甲氧芐啶標準貯備液：精密稱取甲氧芐啶標準品10mg,于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為100ug/mL的甲氧芐啶標準貯備液。-4℃以下避光保存，有效期3個月。

4.17 10ug/mL甲氧芐啶標準工作液：精密量取甲氧芐啶標準貯備液1.0mL,于10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10ug/mL的甲氧芐啶標準工作液。-4℃以下避光保存，有效期3個月。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配紫外檢測器。

5.2 分析天平：感量0.00001g。

5.3 天平：感量0.01g。

5.4 均質(zhì)機

5.5 旋渦混合器

5.6 離心機

5.7 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器

5.8 固相萃取裝置

5.9 茄形瓶

5.10 具塞離心管：50mL。

5.11 分液漏斗：150mL。

5.12 濾膜：0.45um。

6 試料的制備與保存

6.1 試料的制備

取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。

—取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。

—取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。

—取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。

6.2試料的保存

-18℃以下保存。

7 測定步驟

7.1 提取

稱取試料(5±0.05)g,于50mL具塞離心管中，加三氯甲烷15mL、甲醇14mL、0.1mol/L硫酸溶液6mL,旋渦混合2min,4000r/min離心3min,取上清液于150mL分液漏斗中。殘渣中加甲醇14mL和0.1mol/L硫酸溶液6mL,重復提取一次，合并兩次上清液于分液漏斗中，加2mol/L氫氧化鉀溶液2mL、二氯甲烷30mL,振搖2min,靜置分層，取下層液于茄形瓶中，分液漏斗中加二氯甲烷30mL重復提取一次，合并兩次下層液，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用5%乙酸溶液6mL溶解殘余物，備用。

7.2 凈化

MCX陽離子交換柱依次用甲醇6mL和5%乙酸溶液6mL活化，取備用液過柱，用5%乙酸溶液6mL和甲醇6mL淋洗，用氨水甲醇溶液15mL洗脫，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用流動相1.0mL溶解殘余物,濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

7.3 標準曲線的制備

精密量取甲氧芐啶標準工作液適量，用流動相稀釋，配制成濃度為50、200、500、1000、2000、5000ug/L系列標準溶液，供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數(shù)。

7.4 測定

7.4.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX-C₁₈柱(250mm×4.6mm,粒徑5um),或相當者。

流動相：甲醇+0.5%高氯酸溶液(3(0+70,v/v)；

流速：1.0mL/min；

柱溫：35℃；

進樣量：20uL；

檢測波長：230nm。

7.4.2 測定法

取試樣溶液和相應的標準溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算。標準溶液及試樣溶液中甲氧芐啶響應值應在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。

7.5 空白試驗

除不加試料外，采用*相同的步驟進行平行操作。

8 結(jié)果計算

試料中甲氧芐啶的殘留量(ug/kg):按下式計算

式中：

X—試試料中甲氧芐啶的殘留量，ug/kg;

C—試樣溶液中甲氧芐啶的濃度，μg/mL;

V—溶解殘余物體積，mL；

m—供試試料質(zhì)量，g。

注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

9 方法靈敏度、準確度和精卻度

9.1 靈敏度

本方法的定量限為20ug/kg。

9.2 準確度

本方法在20～1000ug/kg添加濃度水平上的回收率為70%～110%。

9.3 方法精密度

本方法批內(nèi)相對標準偏差≤15%,批間相對標準偏差≤15%。